Characterization of proteinuria in treated and untreated dogs naturally infected with Leishmania sp

ABSTRACT: In the search for an early biomarker of renal injury, this study aimed to determine the urinary protein profile of dogs with leishmaniasis without treatment and treated as determined by Brazilian legislation. The identification of proteinuria, its classification and the circumstances in which it takes place instigated this study. For this, 30 dogs from an outpatient clinic at a Veterinary Hospital in Belo Horizonte were evaluated. All animals underwent clinical and laboratory tests, which included renal biomarkers. The proteins were characterized using the SDS-page electrophoresis technique, and thus, a urinary protein profile was developed comparing patients considered clinically healthy with dogs infected with leishmaniasis that were under treatment and with untreated infected dogs. The results showed that the hematological and biochemical parameters showed similar behavior between the groups of healthy dogs and dogs with leishmaniasis treated, however a very heterogeneous pattern of urinary proteins can be observed and differed between healthy animals and animals with leishmaniasis, as well as between treated and untreated animals. The results suggest that the classification of proteinuria can be a tool that helps in the staging of animals infected with L. infantum and can differentiate them as to the severity of existing kidney injuries.

RESUMO: Na busca por um biomarcador precoce de injúria renal, este trabalho teve como objetivo determinar o perfil proteico urinário de cães infectados com leishmaniose sem tratamento e tratados conforme determina a legislação brasileira. A identificação da proteinúria, sua classificação e as circunstâncias em que ocorrem instigaram este estudo. Para tanto, foram avaliados 30 cães oriundos do atendimento clínico ambulatorial de um Hospital Veterinário em Belo Horizonte. Todos os animais passaram por exame clínico e laboratorial, que incluíram biomarcadores renais. As proteínas foram caracterizadas através da técnica de eletroforese por SDS-PAGE, e assim, foi elaborado um perfil proteico urinário comparando pacientes considerados clinicamente hígidos, com cães infectados por Leishmania (L.) infantum e que estavam sob tratamento e cães infectados não tratados. Os resultados demonstraram que os parâmetros hematológicos e bioquímicos apresentaram comportamento semelhante entre os grupos de cães hígidos e de cães infectados com L. infantum tratados, entretanto um padrão muito heterogêneo de proteínas urinárias pode ser observado e diferiu entre animais hígidos e animais com leishmaniose, assim como entre os animais tratados e não tratados. Os resultados sugerem que a classificação da proteinúria pode ser uma ferramenta que auxilia no estadiamento de animais infectados por L. infantum podendo diferenciá-los quanto à gravidade de lesões renais existentes.

Characterization of proteinuria in treated and untreated dogs naturally infected with Leishmania sp / Caracterização da proteinúria de cães tratados e não tratados, naturalmente infectados com Leishmania sp

In the search for an early biomarker of renal injury, this study aimed to determine the urinary protein profile of dogs with leishmaniasis without treatment and treated as determined by Brazilian legislation. The identification of proteinuria, its classification and the circumstances in which it takes place instigated this study. For this, 30 dogs from an outpatient clinic at a Veterinary Hospital in Belo Horizonte were evaluated. All animals underwent clinical and laboratory tests, which included renal biomarkers. The proteins were characterized using the SDS-page electrophoresis technique, and thus, a urinary protein profile was developed comparing patients considered clinically healthy with dogs infected with leishmaniasis that were under treatment and with untreated infected dogs. The results showed that the hematological and biochemical parameters showed similar behavior between the groups of healthy dogs and dogs with leishmaniasis treated, however a very heterogeneous pattern of urinary proteins can be observed and differed between healthy animals and animals with leishmaniasis, as well as between treated and untreated animals. The results suggest that the classification of proteinuria can be a tool that helps in the staging of animals infected with L. infantum and can differentiate them as to the severity of existing kidney injuries.(AU)

Na busca por um biomarcador precoce de injúria renal, este trabalho teve como objetivo determinar o perfil proteico urinário de cães infectados com leishmaniose sem tratamento e tratados conforme determina a legislação brasileira. A identificação da proteinúria, sua classificação e as circunstâncias em que ocorrem instigaram este estudo. Para tanto, foram avaliados 30 cães oriundos do atendimento clínico ambulatorial de um Hospital Veterinário em Belo Horizonte. Todos os animais passaram por exame clínico e laboratorial, que incluíram biomarcadores renais. As proteínas foram caracterizadas através da técnica de eletroforese por SDS-PAGE, e assim, foi elaborado um perfil proteico urinário comparando pacientes considerados clinicamente hígidos, com cães infectados por Leishmania (L.) infantum e que estavam sob tratamento e cães infectados não tratados. Os resultados demonstraram que os parâmetros hematológicos e bioquímicos apresentaram comportamento semelhante entre os grupos de cães hígidos e de cães infectados com L. infantum tratados, entretanto um padrão muito heterogêneo de proteínas urinárias pode ser observado e diferiu entre animais hígidos e animais com leishmaniose, assim como entre os animais tratados e não tratados. Os resultados sugerem que a classificação da proteinúria pode ser uma ferramenta que auxilia no estadiamento de animais infectados por L. infantum podendo diferenciá-los quanto à gravidade de lesões renais existentes.(AU)

Seroprevalence and risk factors associated with canine visceral leishmaniasis in the State of Paraíba, Brazil

Abstract INTRODUCTION: The aim of this study was to determine the seroprevalence and risk factors associated with canine visceral leishmaniasis in Paraíba State. METHODS: Blood samples were collected from 411 dogs in four municipalities of Paraíba State. The seroprevalence was assessed by using ELISA. RESULTS: The seroprevalence ranged from 7.2% to 20%. The risk factors that were associated with the disease were the presence of ticks and contact with other animals. CONCLUSIONS: The seroprevalence of canine visceral leishmaniasis is high in Paraíba, indicating the need for health authorities to resume visceral leishmaniasis control activities. The ruralization of suburban areas in the region tends to homogenize the risk factors between suburban and rural areas.

Molecular Method Confirms Canine Leishmania Infection Detected by Serological Methods in Non-Endemic Area of Brazil

In Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is expanding and becoming urbanized, especially in non-endemic areas such as the State of Rio Grande do Sul. Considering that infected dogs are the main reservoir for zoonotic VL, this study evaluated the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) in the metropolitan area of Porto Alegre, a new area of expansion of VL in Brazil. Serum and plasma from 405 asymptomatic dogs from the municipalities of Canoas (n=107), São Leopoldo (n=216), and Novo Hamburgo (n=82) were tested for CVL using immunochromatographic (DPP®) and ELISA EIE® assays (2 assays officially adopted by the Brazilian government for the diagnosis of CVL) and real-time PCR to confirm the results. There was no agreement among serological and real-time PCR results, indicating that the Leishmania infection in asymptomatic animals with low parasite load, confirmed by negative parasitological tests (smears and parasite culture), need to be evaluated by molecular methods. The prevalence of LVC in the metropolitan region of Porto Alegre, confirmed by real-time PCR was 4% (5.6% in Canoas and 4.6% in São Leopoldo). The use of molecular method is essential for accurate diagnosis of CVL, especially in asymptomatic dogs in non-endemic areas.

Ocular diseases in dogs naturally affected by visceral leishmaniasis in Teresina, Piauí, Brazil / Oftalmopatias em cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral em Teresina, PI, Brasil

ABSTRACT: This study aimed to characterize ocular diseases in dogs naturally affected by visceral leishmaniasis in Teresina, Piauí State, Brazil. The diagnosis was made using parasitological exams of the bone-marrow and lymph-node samples. The main ophthalmological findings were uveitis, conjunctivitis, blepharitis, keratitis, and keratoconjunctivitis sicca. Normocytic normochromic anemia was the main hematological finding, followed by thrombocytopenia. Plasma proteins were also considered, and hyperproteinemia, hypergammaglobulinemia, and hypoalbuminemia were observed. Ocular histopathological examination revealed mild inflammation involving lymphocytes, monocytes, and macrophages. Results indicate the need to perform a differential diagnosis to rule out or establish the presence of Leishmania sp. in dogs presenting with ophthalmic lesions in endemic regions.

RESUMO: O presente trabalho teve por objetivo caracterizar as oftalmopatias em cães naturalmente afetados por leishmaniose visceral em Teresina, Piauí. O diagnóstico de leishmaniose foi realizado por exame parasitológico de medula óssea e linfonodos. As principais alterações oftálmicas foram uveíte, conjuntivite, blefarite, ceratite e ceratoconjuntivite seca. Anemia normocítica normocrômica foi a principal alteração hematológica, seguida de trombocitopenia. Em relação às proteínas plasmáticas observou-se hiperproteinemia, hiperglobulinemia e hipoalbuminemia. A histopatologia ocular revelou processo inflamatório moderado constituído por linfócitos, monócitos, neutrófilos e macrófagos. Os resultados da pesquisa apontam para a necessidade de se realizar diagnóstico diferencial para Leishmania sp. em cães que apresentem lesões oftálmicas em regiões endêmicas.

Aspectos epidemiológicos da leishmaniose visceral canina na zona rural do semiárido paraibano e análise de técnicas de diagnóstico / Epidemiological aspects of canine visceral leishmaniasis in the semi-arid region of Paraiba and analysis of diagnostic techniques

No Brasil, a leishmaniose visceral é causada pela Leishmania infantum. É uma zoonose crônica e, frequentemente, fatal, sendo considerada um grave problema de saúde pública no mundo e reconhecida pela Organização Mundial de Saúde como uma das dezessete "Doenças Tropicais Negligenciadas". O presente estudo foi realizado em 2012, na zona rural do município de Patos, semiárido paraibano, com o objetivo de estimar a prevalência, os fatores de risco da leishmaniose visceral canina (LVC) na região e avaliar os testes de diagnóstico sorológico. Foram coletadas 362 amostras de sangue e a prevalência da infecção foi determinada através de três técnicas sorológicas (ELISA, RIFI e Teste Imunocromatográfico DPP - Dual Path Plataform), sendo consideradas positivas as amostras que apresentaram pelo menos dois testes reagentes. As amostras positivas na sorologia foram testadas na PCR e qPCR. Aplicou-se um questionário epidemiológico aos proprietários para identificação dos possíveis fatores de risco. A taxa de prevalência foi de 11,33% (41/362). Considerou-se o ELISA como padrão ouro, já que é o teste confirmatório para a LVC pelo Ministério da Saúde. O DPP (Dual Path Plataform) apresentou sensibilidade de 58% (95% CI: 0,43-0,72) e especificidade de 96% (95% CI: 0,93-0,98), com índice Kappa de 0,57. A RIFI apresentou sensibilidade de 85% (95% CI: 0,72-0,94), especificidade de 99% (95% CI: 0,98-1) e valor Kappa de 0,88. O fator de risco identificado na análise multivariada por regressão logística múltipla foi o sexo (OR=2,15 [1,09-4,21]) e os cães machos apresentaram 2,15 vezes mais chances de serem infectados, que pode ser justificado por serem mais utilizados para a caça e como cão de guarda, dois fatores que aumentam a exposição do animal ao flebótomo. Em função da taxa de prevalência encontrada, indica-se a aplicação de medidas de controle no município. Os resultados da comparação dos ensaios sorológicos demonstraram que o DPP (Dual Path Plataform) não é a melhor técnica para triagem dos animais positivos em função da baixa sensibilidade do método, sugerindo que o mesmo seja substituído pelo ELISA.(AU)

Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum in Brazil. It is a chronic disease and often a fatal zoonosis and considered as a serious worldwide public health problem and recognized by the World Health Organization as one of seventeen "Neglected Tropical Diseases". This study was conducted in 2012 in the county of Patos, in Paraíba State semiarid region. The main purposes were to estimate the prevalence and the risk factors of canine visceral leishmaniasis (CVL), and to evaluate the performance of serological tests. Serological prevalence was determined using three techniques (ELISA, IFA and DPP chromatographic immunoassay - Dual Path Platform). ELISA was the golden standard, since it is the confirmatory test for CVL as established by the Brazilian Ministry of Health. In total, 362 blood samples were collected and were considered positive if positive by two serological assays. Positive samples were tested by PCR and qPCR. An epidemiological questionnaire was applied to the dog owner to identify risk factors associated with CVL. The seroprevalence was 11.33% (41/362). Chromatographic immunoassay - DPP showed a sensitivity of 58% (95%, CI: 0.43 to 0.72) and specificity of 96% (95%, CI: 0.93-0.98) , with a Kappa index of 0.5. The IFA had a sensitivity of 85% (95%, CI: 0.72 to 0.94), specificity of 99% (95%, CI: 0.98 to 1) and Kappa value of 0.8. The risk factor identified in the multivariate analysis was gender (OR=2.15 [1.09 to 4.21]), male dogs having 2.15 times more chance of being infected. The increased likelihood can possibly be explained by the use of male dogs for hunting and as guard dogs, two factors that increase dog contact to infected sandflies. Due to the prevalence rates, it should be recommended control measures against canine visceral leishmaniasis. The results demonstrated that the Chromatographic immunoassay (DPP-Dual Path Platform) is not the best technique for screening positive animals due to its low sensitivity, suggesting its replacement by ELISA.(AU)

Serological survey on some pathogens in wild brown hares (Lepus europaeus) in Central Italy

OBJECTIVE@#To determine the exposure of wild brown hares [Lepus europaeus (L. europaeus), pallas] to Anaplasma phagocytophilum (A. phagocytophilum), Borrelia burgdorferi (B. burgdorferi) sensu lato, Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi), Leishmania sp., Neospora caninum (N. caninum) and Toxoplasma gondii (T. gondii).@*METHODS@#Two hundred twenty-two blood serum samples of wild brown hares captured in protected areas of the province of Pisa (Central Italy) were tested to detect antibodies against the reported pathogens.@*RESULTS@#Thirty one (14.0%) animals resulted positive for at least one tested agent, with antibody titres ranging from 1:20 to 1:320. In particular, 13 (5.8%) samples were positive to B. burgdorferi s.l., 11 (4.9%) to N. caninum, 3 (1.3%) to T. gondii, 2 (0.9%) to A. phagocytophilum and 2 (0.9%) to Leishmania sp. No samples scored positive to E. cuniculi. Four animals (14.8%) resulted coinfected with 2 different pathogens.@*CONCLUSION@#The obtained results showed that B. burgdorferi s.l. N. caninum, T. gondii, A. phagocytophilum and Leishmania sp. circulate in wild brown hares in Central Italy, suggesting a possible role of L. europaeus as reservoir of these pathogens. The obtained results showed that autochthonous wild brown hares living in Central Italy have been exposed to several pathogens circulating in this area, suggesting a possible role of L. europaeus as reservoir.

Serological survey on some pathogens in wild brown hares (Lepus europaeus) in Central Italy

Objective To determine the exposure of wild brown hares [Lepus europaeus (L. europaeus), pallas] to Anaplasma phagocytophilum (A. phagocytophilum), Borrelia burgdorferi (B. burgdorferi) sensu lato, Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi), Leishmania sp., Neospora caninum (N. caninum) and Toxoplasma gondii (T. gondii). Methods Two hundred twenty-two blood serum samples of wild brown hares captured in protected areas of the province of Pisa (Central Italy) were tested to detect antibodies against the reported pathogens. Results Thirty one (14.0%) animals resulted positive for at least one tested agent, with antibody titres ranging from 1:20 to 1:320. In particular, 13 (5.8%) samples were positive to B. burgdorferi s.l., 11 (4.9%) to N. caninum, 3 (1.3%) to T. gondii, 2 (0.9%) to A. phagocytophilum and 2 (0.9%) to Leishmania sp. No samples scored positive to E. cuniculi. Four animals (14.8%) resulted coinfected with 2 different pathogens. Conclusion The obtained results showed that B. burgdorferi s.l. N. caninum, T. gondii, A. phagocytophilum and Leishmania sp. circulate in wild brown hares in Central Italy, suggesting a possible role of L. europaeus as reservoir of these pathogens. The obtained results showed that autochthonous wild brown hares living in Central Italy have been exposed to several pathogens circulating in this area, suggesting a possible role of L. europaeus as reservoir.

Clinical and histopathological features of myocarditis in dogs with visceral leishmaniasis / Aspectos clínicos e histopatológicos da miocardite em cães com leishmaniose visceral

Visceral leishmaniasis (VL) is a cosmopolitan parasitic zoonosis that can promote myocarditis and heart rate changes in canine and human hosts. Thus, histopathological aspects of the myocardium and clinical, hematological, biochemical, radiological and electrocardiographic data were evaluated in a group of 36 dogs naturally infected with VL (VLG) and compared to data from 15 non-infected dogs (CG=Control Group). A prevalence of asymptomatic dogs was present in the CG (100%) and polysymptomatic dogs in the VLG (66%). In addition, two dogs in the VLG demonstrated systolic murmurs in the mitral valve region: one with a II/VI intensity and the other with a III/VI intensity. The mean values of RBC, hemoglobin and hematocrit were lower in dogs in VLG and were associated with higher values of total protein, total leukocytes, neutrophils, creatine kinase overall (CK) and the CK-MB fraction (CK-MB). The absence of radiographic changes was accompanied by a predominance of respiratory sinus arrhythmia associated with episodes of migratory pacemaker and sinus arrest in dogs in VLG (75%), sinus rhythm in dogs in CG (60%) and decreased P wave amplitude in VLG electrocardiography. Mononuclear cell infiltration was detected in the myocardium of 77,8% of dogs in GVL and classified primarily as mild multifocal lymphohistioplasmacytic. Amastigotes were detected in only one dog, which did not allow the association between myocarditis and parasitism, although the myocardial lesions that were found constitute irrefutable evidence of myocarditis in the VLG dogs, accompanied by lenient electrocardiographic changes compared to CG.

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose parasitária cosmopolita capaz de promover miocardite e alterações no ritmo cardíaco em cães e seres humanos. Dessa forma, os aspectos clínicos, hematimétricos, bioquímicos, radiográficos, eletrocardiográficos e histopatológicos do miocárdio foram avaliados em 36 cães naturalmente infectados com LV (GLV) e comparados a 15 cães não infectados (GC). Houve predomínio de cães assintomáticos no GC (100%) e polissintomáticos no GLV (66%). Dois cães do GLV apresentaram sopro sistólico de intensidade II/VI e III/VI, em região de foco mitral. Os valores médios de hemácia, hemoglobina e hematócrito foram inferiores nos cães do GLV, associados a maiores valores de proteína total, leucócitos totais, neutrófilos, creatinina quinase total (CK) e fração MB (CK-MB). Ausência de alterações radiográficas foi acompanhada de predomínio de arritmia sinusal respiratória associada a episódios de marcapasso migratório e sinus arrest nos cães do GLV (75%), ritmo sinusal nos cães do GC (60%) e diminuição da amplitude da onda P no GLV à eletrocardiografia. Infiltrado inflamatório mononuclear foi detectado no miocárdio de 77,8% dos cães do GLV, classificados, em sua maioria, como linfoistioplasmocitário multifocal leve. A forma amastigota foi detectada em apenas um cão, não permitindo a associação entre a miocardite e a parasitose, ainda que as lesões miocárdicas encontradas constituam prova irrefutável da miocardite nos cães do GLV, acompanhadas por alterações eletrocardiográficas brandas em comparação ao GC.

Prevalência da co-infecção por Leishmania sp. em pacientes portadores de HIV/AIDS atendidos pelo Programa Municipal de DST/AIDS no Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) de Imperatriz-MA / Prevalence of Co-Leishmania sp. in patients with HIV/AIDS Program Attended by Hall of STD/AIDS in the Centre of Testing and Counseling (CTA) Imperatriz of MA

Objetivo: Estimar a Prevalência da ocorrência da infecção por Leishmania sp. em indivíduos convivendo comHIV/AIDS atendidos pelo programa municipal de DST/aids no Centro de Testagem e Aconselhamento (CTA) deImperatriz-MA. Método: Foi realizado um estudo descritivo transversal, a população de estudo foi constituída por199 indivíduos. A coleta de dados foi feita por meio de um questionário para a obtenção de dados demográficos,socioeconômicos e epidemiológicos, bem como foi realizado exame de coleta de material biológico (sangue) de todosos pacientes para detecção da infecção por Leishmania sp., por meio de exames laboratoriais (contagem de CD4 eCD8) e pesquisa da PCR. Resultados:Entre os pacientes observou-se similaridade entre a frequência dos gêneros,49,2% masculino e 50,8% feminino, com média de idade de 40 anos. Foi observado que 61,8% possuem baixo nívelde instrução e 69,3% possuem renda mensal de até um salário mínimo. 2,01% (4/199) dos pacientes analisadosapresentaram co-infecçãoLeishmania/HIV. Sendo, destes, 3 que apresentaram infecção mista por Leishmania (V.) spe Leishmania (L.) amazonensis, causadores de LTA e um paciente infectado por Leishmania (L.) chagasi, causadorde LV. Conclusões:Este estudo permitiu conhecer a magnitude da prevalência da co-infecçãoLeishmania/HIV.Assim, sugerimos que o teste anti-Leishmaniaseja realizado em todos os indivíduos com HIV/Aids, e que sejamincrementadas políticas públicas voltadas para essa problemática.

Objective: To estimate the prevalence of infection with Leishmania sp. in individuals living with HIV / AIDSserved by the municipal STD / AIDS in the Counseling and Testing Center (ATC) of Imperatriz-MA. Method: Adescriptive cross-sectional study was conducted, the study population consisted of 199 individuals. Data collectionwas done through a questionnaire in order to obtain demographic, socioeconomic and epidemiological data, as wellas examination was performed to collect biological material (blood) of all patients for detection of Leishmania sp.,through laboratory tests (CD4 and CD8) and PCR research. Results:It was observed, among patients,similaritybetween the gender frequency, 49.2% male and 50.8% female, mean age 40 years. 61.8% of the surveyed have a lowlevel of education and 69.3% have a monthly income of up to minimum wage. 2.01% (4/199) of patients analyzedshowed co-infection Leishmania / HIV. From these, three showed that mixed infection by Leishmania (V.) sp andLeishmania (L.) amazonensis, causing LTA and one patient infected by Leishmania (L.) chagasi, causative of LV.Conclusions: This study showed the magnitude of prevalence of co-infection Leishmania / HIV. Thus, it is suggestedthat the anti-Leishmania test be performed on all individuals with HIV / AIDS, in which focus on public policy issuesthat are incremented.

Transmission routes of visceral leishmaniasis in mammals / Vias de transmissão da leishmaniose visceral em mamíferos

Visceral leishmaniasis (VL) is a chronic disease caused by Leishmania infantum. The major sites of parasite localization in infected animals are the secondary lymphoid organs, bone marrow and cutaneous tissue. However, reports exist on the detection of the parasite in the organs of the male and female genital system. The main route of transmission is related to the hematophagous sandfly vectors of the genus Lutzomyia(New World) and Phlebotomus(Old World). However, other routes of transmission may be mentioned, such as sexual, vertical, hematogenic without vector and others involved in VL epidemiology. Thus, the current article reviews the main forms of transmission of visceral leishmaniasis in mammals

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica causada pelo protozoárioLeishmania infantum.Os principais sítios de localização do parasito nos animais acometidos pela LV foram órgãos linfoides primários, secundários e tegumento. Contudo, existem relatos da detecção do parasito em órgãos do sistema genital masculino e feminino. A principal via de transmissão decorre da ação hematófaga de vetores flebotomíneos pertencentes aos gêneros Lutzomyia(Novo Mundo) e Phlebotomus(Velho Mundo). Todavia, outras formas de transmissão podem ser relacionadas, como as vias sexual, vertical, hematógena não vetorial e ainda existe a possibilidade de outros vetores estarem envolvidos na epidemiologia da doença. Dessa forma, a proposta deste artigo foi revisar as principais formas de transmissão da leishmaniose visceral em mamíferos

Associação da carga parasitária renal com achados laboratoriais em cães com leishmaniose visceral / Renal parasite load association with laboratory findings in dogs with visceral Leishmaniasis

A leishmaniose visceral canina é uma doença grave e a morte ocorre por falência renal, considerando que os métodos diagnósticos convencionais não possibilitam a classificação clínica do animal. O objetivo deste estudo foi associar a carga parasitária renal aos achados clínicos e histopatológicos em cães com leishmaniose visceral. A análise microscópica revelou predomínio de nefrite intersticial mononuclear de graus variados em 59,3% dos cães avaliados. Entretanto, não houve diferença entre a carga parasitária renal de sintomáticos e oligossintomáticos (P= 0,35). As lesões renais foram de ordem inflamatória e a quantidade de parasitos não influenciaram na característica dessas lesões e nem nas alterações bioquímicas, mesmo em cães com diferentes classificações clínicas.

Canine visceral leishmaniasis is a severe disease and the death occurs from renal failure, whereas conventional diagnostic methods do not allow the animal clinical staging. The aim of this study was to associate the renal parasite load to clinical and histopathological findings in dogs with visceral Leishmaniasis. Microscopic analysis revealed a predominance of mononuclear interstitial nephritis of varying degrees in 59, 3% of dogs evaluated. However, no difference was found between the renal parasite load of symptomatics and oligosymptomatics (P= 0,35). Renal lesions were inflammatory order and amount of parasites not influenced the characteristics of theses lesions nor biochemical changes, even in dogs with different clinical classifications.

Caracterização clínica e epidemiológica das leishmanioses em cães no Estado de São Paulo / Clinical and epidemiological characterization of leishmaniasis in dogs in São Paulo State

Caracterizou-se retrospectivamente, a partir do ano de 1997 até março de 2008, a ocorrência de casos de leishmaniose, visceral ou tegumentar, dentre os cães dermatopatas atendidos em serviço especializado de hospital-escola veterinário de Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Para o diagnóstico em 427 animais, foram utilizados testes sorológicos (Ensaio Imunoenzimático Indireto, Imunofluorescência Indireta e/ou Fixação de Complemento), parasitológicos diretos e moleculares (Reação em Cadeia da Polimerase), que resultaram na confirmação de 117 (27,4%) casos positivos. Da amostragem, 96 (82,1%) eram cães de raça definida, os demais 21 (17,9%) não dispunham de plena definição racial, sendo 57 (48,7%) fêmeas e 60 (51,3%) machos. Quanto à faixa etária, 26 (22,2%) apresentavam idade inferior a 36 meses, 48 (41%) entre 36 e 84 meses e 43 (36,8%) ultrapassavam o sétimo ano de vida. Considerou-se 64 (54,7%) cães como oligossintomáticos, 44 (37,6%) sintomáticos e os nove (7,7%) remanescentes como assintomáticos. As principais alterações clínicas observadas foram, em ordem decrescente, lesões tegumentares, linfonodomegalia, anemia, disorexia, prostração e esplenomegalia. Quanto às alterações hematológicas, a mais importante foi a linfopenia relativa e absoluta. Dos animais positivos para a enfermidade, 96 (82,1%) correspondeu a casuística alóctone ao Município de São Paulo.

The occurrence of visceral or cutaneous canine leishmaniasis cases among dermatophatic dogs admitted to the veterinary teaching hospital School of Veterinary Medicine and Animal Husbandry - University of São Paulo from 1997 to 2008 was retrospectively characterized. For the diagnosis of 427 animals, serological (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, Indirect Immunofluorescence and/or Complement Fixation), parasitological and molecular (Polymerase Chain Reaction) tests were performed, which resulted in 117 (27.4%) confirmed positive cases. Of these, 96 (82.1%) were pure breed dogs and the others 21 (17.9%) were cross breed, being 57 (48.7%) females and 60 (51.3%) males. In terms of age, 26 (22.2%) were younger than 36 months, 48 (41%) were between 36 and 84 months, and 43 (36.8%) were older than seven years old. Sixty-four (54.7%) dogs were considered oligosymptomatic, 44 (37.6%) symptomatic, and the remaining nine (7.7%) asymptomatic. The main clinical findings were, in descending order, dermal lesions, lymphadenopathy, anemia, dysorexia, prostration and splenomegaly. As for hematological disorders, relative and absolute lymphopenia was the most important findings. Ninety-six (82.1%) of the positive animals correspond to allochthonus cases from São Paulo municipality.

Patologias genitais associadas à leishmaniose visceral canina / Genital pathologies associated with canine visceral leishmaniasis

A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença parasitária crônica causada por protozoários pertencentes ao gênero Leishmania. No Brasil, a transmissão se dá, principalmente, pela ação hematófaga de insetos vetores pertencentes à subfamília Phlebotominae, particularmente, a espécie Lutzomyia longipalpis. Todavia, a trasmissão vertical e venérea da LVC está presente. Os principais sinais clínicos observados nos animais acometidos pela LVC são linfoadenomegalia, dermatopatias, hepatoesplenomegalia, onicogrifose e oftalmopatias, contudo quadros atípicos podem ser observados, inclusive com o envolvimento do sistema genital. Dessa forma, o objetivo deste artigo é realizar revisão sobre as principais patologias genitais em cães machos e fêmeas com leishmaniose visceral (LV).

The canine visceral leishmaniasis (CanL) is a chronic parasitic disease caused by protozoa belonging to the genus Leishmania. In Brazil, the transmission occurs mainly by the action of blood-sucking insects belonging to the subfamily Phlebotominae, particularly the Lutzomyia longipalpis species. However, the venereal and vertical transmission of the CanL is present. The main clinical signs observed in animals affected by the CanL are lymphadenopathy, skin diseases, hepatosplenomegaly, onychogryphosis and ophthalmopathy, however atypical manifestations can be observed, including the involvement of the genital system. Thus, the aim of this paper is to review on the major pathologies in genital male and female dogs with visceral leishmaniasis (VL).

Soroprevalência da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) canina e fauna de Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) em Bela Vista do Paraíso, Paraná / Seroprevalence of Cutaneous Leishmaniasis (LC) in dogs and identification of vectors (Diptera: Psychodidae) in Bela Vista do Paraíso, Parana state

O trabalho teve como objetivo determinar a soroprevalência da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) canina no município de Bela Vista do Paraíso, Paraná, comparar as técnicas de imunofluorescência indireta (IFI) e ensaio imunoenzimático (ELISA) e identificar as espécies de flebotomíneos presentes, possivelmente envolvidas no ciclo do parasito. Amostras de sangue de 489 cães foram submetidas à pesquisa de anticorpos anti-Leishmania sp. pela IFI e ELISA. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram título ≥ 40 na IFI e densidade ótica ≥ 0.174 no ELISA. Entre as amostras analisadas, 222 (45,4%) foram reagentes pela IFI e 189 (38,7%) pelo ELISA. Comparando-se os testes foram encontradas 176 amostras positivas (36,0%) e 254 negativas (51,9%) para ambas as técnicas. A sensibilidade do ELISA foi de 79,3% e a especificidade foi de 95,1%. O coeficiente global do teste foi de 87,0% com coeficiente Kappa de 0,75. A análise das variáveis para cães com sorologia positiva pela IFI demonstrou diferença significativa em relação à ausência de matas e ausência de convívio com outras espécies animais. Em cães sororeagentes pelo ELISA as variáveis que apresentaram diferença significativa foram o tipo de mata ciliar existente no ambiente, a ausência de lixo, o esgoto a céu aberto e lançado diretamente em rios ou córregos e do lixo lançado em terreno baldio, queimado ou enterrado. O resultado obtido com a captura dos flebotomíneos foi a predominância do Lutzomyia whitmani com 79,9% das espécies coletadas. Os resultados demonstraram que a LTA está amplamente disseminada na população canina do município de Bela Vista do Paraíso, e que tanto a IFI como o ELISA podem ser utilizados para o diagnóstico. Deste modo o cão apresenta-se como um elo entre o ciclo silvestre e o peridomiciliar da LTA, podendo tornar-se um sinalizador do agente no ecossistema da doença nesse ecossistema.

The aim of this study was to determine the seroprevalence of Cutaneous Leishmaniasis (CL) in dogs of Bela Vista do Paraiso, Parana state, compare the IFA and ELISA techniques and identify the vectors possibly involved in the cycle of the parasite. Were collected blood samples from 489 dogs that were subjected to detection of anti-Leishmania sp. by IFA and by ELISA. Were considered positive samples ≥40 titers in IFA and for ELISA ≥ 0.174 optical density. Among the samples analyzed, 222 (45.4%) were positive by IFA and 189 (38.7%) by ELISA. Comparing the tests were found 176 positive samples (36.0%) and 254 negative (51.9%) for both techniques. The sensitivity of ELISA was 79.3% and specificity was 95.1%. The global coefficient of the test was 87.0% with kappa coefficient of 0.75. Analysis of variables for dogs with positive serology by IFA showed significant differences regarding the absence of forests and lack of contact with other animal species. Positive sera by ELISA in dogs variables that showed significant differences were the type of riparian vegetation existing in the environment, the lack of garbage, open sewers and released directly into rivers or streams and garbage thrown on wasteland, burned or buried. The result obtained with the capture of sandflies was the predominance of Lutzomyia whitmani with 79.9% of the species collected. The result obtained with the capture of sandflies was the predominance of Lutzomyia whitmani with 79.9% of the species collected. The results showed that the LTA is widespread in the canine population of Bela Vista do Paraiso, and both the IFI and ELISA can be used for diagnosis. So the dog appears as a link between wild and peridomestic cycle of CL may become an amplifier of disease in this ecosystem.

Effects of seco-steroids purified from Physalis angulata L., Solanaceae, on the viability of Leishmania sp / Efeitos de seco-esteróides purificados de Physalis angulata L., Solanaceae na viabilidade de Leishmania sp

Physalis angulata L., Solanaceae, is an annual herb commonly used in popular medicine in many tropical and subtropical countries. P. angulata extracts contain a variety of substances, but little is known about their pharmacological activities. In this work we investigated the in vitro antileishmanial activity of seco-steroids (physalins) purified from P. angulata. Addition of physalins B, F, and G caused a concentration-dependent inhibition in the growth of L. amazonensis promastigotes, being the IC50 values were 6.8, 1.4, and 9.2 μM, respectively. Physalin D was less active and had an IC50 value of 30.5 μM. Physalins were also active in cultures of other Leishmania species (L. major, L. braziliensis, and L. chagasi). Our results demonstrate the potent antileishmanial activity of physalins in cultures of Leishmania species of the New and Old Worlds and suggest the therapeutic potential of these seco-steroids in leishmaniasis.

Physalis angulata L., Solanaceae, é uma erva anual utilizada na medicina popular em muitos países tropicais e subtropicais. Apesar dos extratos da P. angulata apresentarem uma grande variedade de substâncias, pouco é conhecido sobre a sua atividade farmacológica. Neste trabalho foi investigado a atividade antileishmania in vitro de seco-esteroides (fisalinas) purificados da P. angulata. O tratamento com as fisalinas B, F e G causou uma inibição concentração-dependente do crescimento de promastigotas de Leishmania amazonensis em cultura axênica, com valores de IC50 de 6,8, 1,4, e 9,2 μM respectivamente. A fisalina D foi menos ativa, com valores de IC50 de 30,5 μM. Foi também observada uma atividade leishmanicida em culturas de outras espécies de Leishmania (L. major, L. braziliensis e L. chagasi). Nossos resultados demonstram que as fisalinas inibem o crescimento dos promastigotas com o tratamento de espécies de Leishmania do Velho e do Novo Mundos e sugerem o potencial terapêutico destas moléculas na leishmaniose.

Ocorrência de leishmaniose em gatos de área endêmica para leishmaniose visceral / Occurrence of leishmaniasis in cats from endemic area for visceral leishmaniasis

Apesar da descrição de vários casos de leishmaniose felina no mundo, pouco se sabe sobre a importância do gato como um reservatório da doença. O objetivo do presente estudo foi determinar a ocorrência de leishmaniose em gatos provenientes de uma área endêmica para leishmaniose visceral no Brasil. Duzentos gatos foram incluídos no estudo. A presença de infecção foi determinada por meio do achado de formas amastigotas do parasita em esfregaços obtidos por punção biópsia aspirativa de linfonodos, medula óssea, baço e fígado, e pela presença de anticorpos anti-L. chagasi pelo teste de ELISA indireto. Nossos resultados demonstraram uma prevalência de infecção em 14,5% (31/200) dos gatos na população estudada, sendo 4% (8/200) por diagnóstico parasitológico e 11,5% (23/200) por sorologia.

Despite the description of several cases of feline leishmaniasis around the world, little information is available about the importance of the cat as a reservoir of the disease. The aim of the present study was to determine the occurrence of leishmaniasis in cats from an endemic area for visceral leishmaniasis in Brazil. Two hundred cats were included in this study. Infection was evaluated through the presence of amastigotes in stained smears from fine-needle aspirates of lymph nodes, bone marrow, spleen and liver, and by antibody reactivity against Leishmania chagasi using indirect ELISA. Our results showed a prevalence of infection in 14.5% (31/200) of the feline population studied, with 4% (8/200) of positivity by parasitological diagnosis and 11.5% (23/200) by serology.

Surveillance of canine visceral leishmaniasis in a disease-free area / Vigilância da leishmaniose visceral canina em área indene

Leishmaniasis is an important re-emergent parasitosis worldwide, particularly in tropical countries. There are no reports of autochthonous disease in the State of Paraná, southern Brazil. No surveillance has been carried out in the most populated areas such as the city of Curitiba and its surroundings. The purpose of the present study was to determine the seroprevalence of visceral leishmaniasis in dogs at the Center for Zoonosis Control of São José dos Pinhais, Paraná, before euthanasia. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunofluorescence antibody test (IFAT) were used to detect antibody levels against Leishmania sp. in dog sera. Imprints of the popliteal lymph nodes that were also randomly collected from 50 dogs with suspected clinical signs of visceral leishmaniasis, and evaluated under light microscopy for the detection of amastigote forms, were negative. A total of 364 dog samples were tested. The results showed only one positive sample (0.0027 percent) by ELISA test but negative by IFAT, however, the dog had no clinical signs. Random surveillance of dog populations from several districts of a metropolitan area may be a means of preventing Leishmania spreading. Based on our results, the city of Curitiba and its metropolitan area were considered at low risk for visceral leishmaniasis.

A leishmaniose é uma importante parasitose re-emergente observada no mundo, particularmente em países tropicais. Não há ainda relatos de casos autóctones no estado do Paraná. Não há até o momento referência de vigilância no reservatório canino, tais como Curitiba e região metropolitana do estado. O objetivo do estudo foi determinar a soroprevalência da leishmaniose visceral em cães entregues ao Centro de Controle de Zoonoses de São José dos Pinhais, Paraná para eutanásia. A detecção sorológica da presença de anticorpos contra Leishmania sp. foi realizada por (ELISA) indireto e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Além disso, impressão de linfonodo poplíteo coletadas ao acaso de 50 cães com sinais clínicos suspeitos para leishmaniose visceral e analisados sob microscopia óptica para detecção de formas amastigotas, foram negativas. Amostras de soro de 364 animais foram testadas, e os resultados mostraram somente uma amostra positiva (0,0027 por cento), reagente ao ELISA e negativa à RIFI, entretanto, o cão não apresentava sinais clínicos. A vigilância ao acaso em uma população de vários locais de uma área metropolitana pode ser uma forma de prevenção da disseminação da doença. Com base nos resultados observados, Curitiba e região metropolitana foram consideradas de baixo risco para a leishmaniose visceral.

Surveillance of canine visceral leishmaniasisin a disease-free area / Vigilância da leishmaniose visceral canina em área indene

Leishmaniasis is an important re-emergent parasitosis worldwide, particularly in tropical countries. There are no reports of autochthonous disease in the State of Paraná, southern Brazil. No surveillance has been carried out in the most populated areas such as the city of Curitiba and its surroundings. The purpose of the present study was to determine the seroprevalence of visceral leishmaniasis in dogs at the Center for Zoonosis Control of São José dos Pinhais, Paraná, before euthanasia. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunofluorescence antibodytest (IFAT) were used to detect antibody levels against Leishmania sp. in dog sera. Imprints of the popliteal lymph nodes that were also randomly collected from 50 dogs with suspected clinical signs of visceral leishmaniasis, and evaluated under light microscopy for the detection of amastigote forms, were negative. A total of 364 dog samples were tested. The results showed only one positive sample (0.0027%) by ELISA test but negative by IFAT, however, the dog had no clinical signs. Random surveillance of dog populations from several districts of a metropolitan area may be a means of preventing Leishmania spreading. Based on our results, the city of Curitiba and its metropolitan area were considered at low risk for visceral leishmaniasis.

A leishmaniose é uma importante parasitose re-emergente observada no mundo, particularmente em países tropicais. Não há ainda relatos de casos autóctones no estado do Paraná. Não há até o momento referência de vigilância no reservatório canino, tais como Curitiba e região metropolitana do estado. O objetivo do estudo foi determinar a soroprevalência da leishmaniose visceral em cães entregues ao Centro de Controle de Zoonoses de São José dos Pinhais, Paraná para eutanásia. A detecção sorológica da presença de anticorpos contra Leishmania sp. foi realizada por(ELISA) indireto e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Além disso, impressão de linfonodo poplíteo coletadas ao acaso de 50 cães com sinais clínicos suspeitos para leishmaniose visceral e analisados sob microscopia óptica para detecção de formas amastigotas, foram negativas. Amostras de soro de 364 animais foram testadas, e os resultados mostraram somente uma amostra positiva (0,0027%), reagente ao ELISA e negativa à RIFI, entretanto, o cão não apresentava sinais clínicos. A vigilância ao acaso em uma população de vários locais de uma área metropolitana pode ser uma forma de prevenção da disseminação da doença. Com base nos resultados observados, Curitiba e região metropolitana foram consideradas de baixo risco para a leishmaniose visceral.

Study of cross-reactivity in serum samples from dogs positive for Leishmania sp., Babesia canis and Ehrlichia canis in enzyme-linked immunosorbent assay and indirect fluorescent antibody test / Estudo da reatividade cruzada em amostras de soro de cães positivos para Leishmania sp., Babesia canis e Ehrlichia canis, pelo ensaio imunoenzimático indireto e pela reação de imunofluorescência indireta

To verify the presence of cross-reaction among leishmaniosis, ehrlichiosis and babesiosis in serological diagnostics used in human visceral leishmaniasis control programs, serum samples from leishmaniasis endemic and non-endemic areas were collected and tested by Indirect Fluorescent Antibody (IFAT) and Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). All serum samples from endemic areas were positive for Leishmania sp., by ELISA and IFAT, 51 percent positive for Babesia canis and 43 percent for Ehrlichia canis by IFAT. None of the serum samples from non-endemic areas were positive for Leishmania sp., by IFAT, but 67 percent were positive for B. canis and 78 percent for E. canis using the same test. When tested by ELISA for Leishmania sp., four samples from non-endemic area were positive. These dogs were then located and no clinical signs, parasites or antibody was detected in new tests for a six month period. Only one of these 4 samples was positive for B. canis by IFAT and ELISA and three for E. canis by IFAT. The results of the work suggest a co-infection in the endemic area and no serological cross-reaction among these parasites by IFAT and ELISA.

Para verificar a existência de reação cruzada entre leishmaniose visceral, erliquiose e babesiose, nos testes sorológicos utilizados em programas de controle da leishmaniose visceral humana, amostras de soro canino provenientes de áreas endêmicas e não endêmicas para essa enfermidade, foram testadas pela Reação de Imunofluorescência (RIFI) e Ensaio imunoenzimático (ELISA). Todos os soros provenientes de área endêmica foram positivos para Leishmania sp pelo ELISA e RIFI, 51 por cento para Babesia canis e 43 por cento para Ehrlichia canis pela RIFI. Pela RIFI, nenhum dos soros provenientes de área não endêmica foi positivo para Leishmania sp, sendo 67 por cento positivos para B. canis e 78 por cento para E. canis pelo mesmo teste. Quando testados pelo ELISA para Leishmania sp., quatro soros da área não endêmica foram positivos. Os cães foram localizados e nenhum sinal clínico, parasito ou anticorpo foi detectado em novos exames realizados ao longo de seis meses. Os resultados desse trabalho sugerem portanto, a presença de uma co-infecção entre os três parasitos citados nas áreas endêmicas e não a reação cruzada entre eles, nos testes sorológicos de RIFI e ELISA descritos.